Hiivanäyttö - Yeast display
Hiivanäyttö (tai hiivan pinnanäyttö ) on proteiinitekniikka , joka käyttää hiivan soluseinämään sisällytettyjen yhdistelmäproteiinien ilmentymistä vasta -aineiden eristämiseen ja muokkaamiseen .
Kehitys
Hiivan näyttötekniikka julkaistiin ensimmäisen kerran professori K. Dane Wittrupin laboratoriossa . Tekniikka myytiin Abbott Laboratoriesille vuonna 2001.
Kuinka se toimii
Kiinnostava proteiini esitetään fuusiona Aga2p -proteiiniin hiivan pinnalla. Hiiva käyttää Aga2p -proteiinia luonnollisesti välittämään solu -solukontaktit hiivasolujen parittelun aikana. Siten proteiinin näyttäminen Aga2p: n kautta projisoi proteiinin pois solun pinnalta minimoiden mahdolliset vuorovaikutukset muiden hiivasoluseinän molekyylien kanssa. Käyttö magneettinen erottelu ja virtaussytometria yhdessä hiivan display-kirjastosta on erittäin tehokas tapa eristää korkean affiniteetin proteiinin ligandeja vastaan lähes minkä tahansa reseptorin kautta suunnattu evoluutio .
Hyödyt ja haitat
Hiivanäytön etuja muihin in vitro -kehitysmenetelmiin verrattuna sisältävät eukaryoottinen ilmentyminen ja käsittely, eukaryoottisen eritysreitin laadunvalvontamekanismit, vähäiset aviditeettivaikutukset ja kirjallinen kvantitatiivinen seulonta fluoresoivalla aktivoidulla solulajittelulla (FACS). Hiiva on eukaryoottisia organismeja, jotka mahdollistavat monimutkaiset translaation jälkeiset muutokset proteiineihin, joita mikään muu näyttökirjasto ei pysty tarjoamaan.
Haittoja ovat pienemmät mutanttikirjaston koot verrattuna vaihtoehtoisiin menetelmiin ja erilainen glykosylaatio hiivassa verrattuna nisäkässoluihin. Vaihtoehtoisia menetelmiä proteiinin evoluutioon in vitro ovat nisäkkäiden näyttö , faaginäyttö , ribosominäyttö , bakteerinäyttö ja mRNA -näyttö .
Viitteet
Lue lisää
- Boder, ET, Wittrup, KD; Biotechnol. Prog., 1998, 14, 55–62.
- Boder ET, Midelfort KS, Wittrup KD; Proc. Natl. Acad. Sei., 2000, 97 (20): 10701-10705.
- Graff, CP, Chester, K., Begent, R., Wittrup, KD; Prot. Eng. Des. Sel., 2004, 17, 293–304.
- Feldhaus M, Siegel R .; Methods in Molecular Biology 263: 311–332 (2004).
- Weaver-Feldhaus, Jane M; Lou, Jianlong; Coleman, James R; Siegel, Robert W; Marks, James D; Feldhaus, Michael J (2004). "Hiivan pariutuminen yhdistelmä Fab -kirjaston luomiseen ja pinnanäyttöön" . FEBS -kirjeet . 564 (1–2): 24–34. doi : 10.1016/S0014-5793 (04) 00309-6 . ISSN 0014-5793 . PMID 15094038 . S2CID 29737912 .