Coombsin testi - Coombs test

Coombsin testi
MeSH D003298
MedlinePlus 003344

Coombsin koe , joka tunnetaan myös nimellä antiglobuliinikoetta ( AGT ) on joko kaksi verikokeita käytetään immunohematology . Ne ovat suoria ja epäsuoria Coombs -testejä. Suora Coombs -testi havaitsee vasta -aineita, jotka ovat juuttuneet punasolujen pintaan. Koska nämä vasta -aineet tuhoavat joskus punasoluja, henkilö voi olla aneeminen ja tämä testi voi auttaa selventämään tilan. Epäsuora Coombs tunnistaa vasta -aineet, jotka kelluvat vapaasti veressä. Nämä vasta -aineet voivat toimia tiettyjä punasoluja vastaan ​​ja testi voidaan tehdä verensiirron reaktioiden diagnosoimiseksi .

Suora Coombsin testillä testi autoimmuuni hemolyyttinen anemia -se on, tila, jossa immuunijärjestelmä hajoaa punasoluja , mikä johtaa anemiaan . Suoraa Coombs -testiä käytetään vasta -aineiden tai komplementaaristen proteiinien havaitsemiseen punasolujen pintaan. Testin suorittamiseksi otetaan verinäyte ja punasolut pestään (poistetaan potilaan oma plasma ja sitoutumattomat vasta-aineet punasoluista) ja inkuboidaan sitten anti-ihmisglobuliinin ("Coombs-reagenssi") kanssa. Jos punasolut sitten agglutinoituvat , suora Coombs -testi on positiivinen, mikä on visuaalinen osoitus siitä, että vasta -aineet tai komplementtiproteiinit ovat sitoutuneet punasolujen pintaan ja voivat aiheuttaa näiden solujen tuhoutumista.

Epäsuoraa Coombs -testiä käytetään raskaana olevien naisten synnytystä edeltävissä testeissä ja ennen verensiirtoa. Testi havaitsee vasta -aineita vieraita punasoluja vastaan. Tässä tapauksessa seerumi uutetaan potilaalta otetusta verinäytteestä. Seerumia inkuboidaan vieraiden punasolujen kanssa, joilla on tunnettu antigeenisyys . Lopuksi lisätään ihmisen vastainen globuliini. Jos agglutinaatio tapahtuu, epäsuora Coombs -testi on positiivinen.

Mekanismi

Kaavio, joka esittää suoria ja epäsuoria Coombs -testejä.

Molemmat Coombs-testit perustuvat ihmisen vasta - aineisiin, jotka sitoutuvat ihmisen vasta-aineisiin, yleensä IgG: hen tai IgM: ään . Nämä anti-ihmisen vasta-aineita tuotetaan plasman soluja ei-ihmis-eläimiä jälkeen immunisoimalla ne ihmisen plasman . Lisäksi, nämä anti-humaani-vasta-aineet sitoutuvat myös ihmisen vasta-aineet, jotka voivat olla kiinnitetty antigeenejä pinnalla punasoluja (RBC: itä). Sopivissa koeputkiolosuhteissa tämä voi johtaa punasolujen agglutinaatioon ja mahdollistaa tuloksena olevien punasolujen kohoumien visualisoinnin. Jos paakkuuntuminen näkyy, Coombsin testi on positiivinen; jos ei, Coombsin testi on negatiivinen.

Tavallisia kliinisiä käyttöjä Coombsin testin ovat valmistamiseksi veren verensiirtoon in cross-matching , epätyypillinen vasta-aineiden veriplasmassa on raskaana naisten osana synnytystä edeltävällä , ja vasta-aineiden havaitsemiseksi ja diagnosoimiseksi immuunivälitteinen hemolyyttinen anemiat .

Coombs -testit suoritetaan käyttämällä punasoluja tai seerumia (suoraan tai epäsuorasti) laskimoiden kokoverinäytteistä, jotka on otettu potilailta laskimopunktion avulla . Laskimoveri viedään laboratorioon (tai veripankkiin), jossa koulutettu tieteellinen tekninen henkilöstö tekee Coombs -testit. Tuloksen kliinisen merkityksen arvioi lääkäri, joka pyysi Coombs-testiä, ehkä laboratorio- hematologin avustuksella .

Suora Coombs -testi

Suoraa Coombs -testiä, jota kutsutaan myös suoraksi antiglobuliinitestiksi (DAT), käytetään havaitsemaan, ovatko vasta -aineet tai komplementtisysteemitekijät sitoutuneet punasolujen pinta -antigeeneihin. DAT: ää ei tällä hetkellä vaadita verensiirtoa edeltävässä testauksessa, mutta jotkut laboratoriot voivat sisällyttää sen. Ennen verensiirtoa potilailla on usein epäsuora Coombs-testi.

Käyttää

Algoritmi positiivisille DAT -diagnooseille.

Suoraa Coombs-testiä käytetään kliinisesti, kun epäillään immuunivälitteistä hemolyyttistä anemiaa (vasta-ainevälitteistä punasolujen tuhoutumista). Positiivinen Coombs -testi osoittaa, että immuunimekanismi hyökkää potilaan punasoluihin . Tämä mekanismi voi olla autoimmuuni , alloimmuniteetti tai lääkkeen aiheuttama immuunivälitteinen mekanismi.

Esimerkkejä alloimmuunihemolyysistä

Esimerkkejä autoimmuunihemolyysistä/immunohemolyyttisestä hemolyysistä

Lääkkeen aiheuttama immuunivälitteinen hemolyysi

  • Metyylidopa (IgG -välitteinen tyypin II yliherkkyys)
  • Penisilliini (suuri annos)
  • Kinidiini (IgM -välitteinen klassisen komplementtireitin aktivointi ja MAC -hyökkäyskompleksi, MAC)

( Muistilaite muistaa, että DAT testaa punasoluja ja sitä käytetään imeväisten testaamiseen vastasyntyneen hemolyyttisen sairauden varalta : R h D isease ; R = punasolut, D = DAT.)

Laboratorio

Potilaan punasolut pestään (poistetaan potilaan oma seerumi ) ja sentrifugoidaan sitten antihumaanisella globuliinilla (tunnetaan myös Coombs -reagenssina). Jos immunoglobuliini tai komplementtitekijät on kiinnitetty punasolujen pinnalle in vitro , antihumaaninen globuliini agglutinoi punasolut ja suora Coombs-testi on positiivinen. (Positiivisen suoran Coombs -testin visuaalinen esitys esitetään kaavion yläosassa).

Epäsuora Coombs -testi

Epäsuoraa Coombs-testiä, jota kutsutaan myös epäsuoraksi antiglobuliinitestiksi (IAT), käytetään havaitsemaan in vitro vasta-aine-antigeenireaktiot. Sitä käytetään havaitsemaan hyvin alhaiset vasta -ainepitoisuudet potilaan plasmassa/seerumissa ennen verensiirtoa. Synnytystä edeltävässä hoidossa IAT: ta käytetään raskaana olevien naisten seulomiseen vasta -aineiden varalta, jotka voivat aiheuttaa vastasyntyneen hemolyyttisen sairauden . IAT: ta voidaan käyttää myös yhteensopivuustestaukseen , vasta -aineiden tunnistamiseen, punasolujen fenotyyppityöhön ja titraustutkimuksiin.

Käyttää

Verensiirron valmistelu

Pääartikkelit: verensiirto ja ristisovitus

Epäsuora Coombsin testiä käytetään näytön vasta-aineiden valmistamiseksi veren varten verensiirron . Luovuttajan ja vastaanottajan veren on oltava ABO- ja Rh D -yhteensopivia. Luovuttajan verta verensiirron yhteydessä tutkitaan myös infektioiden varalta erillisissä prosesseissa.

  • Vasta -aineiden seulonta

Vastaanottajan verinäyte ja verinäyte jokaisesta luovuttajaveriyksiköstä seulotaan vasta -aineiden varalta epäsuoralla Coombs -testillä. Kutakin näytettä inkuboidaan monenlaisia ​​punasoluja vastaan, jotka yhdessä osoittavat täyden valikoiman pinta -antigeenejä (eli verityyppejä ).

  • Ristisovitus

Epäsuoraa Coombs -testiä käytetään tutkimaan vastaanottajan seerumin näytteen vasta -aineita verenluovuttajan punasolujen näytettä vastaan . Tätä kutsutaan joskus ristikkäiseksi vertaksi.

Synnytystä edeltävien vasta -aineiden seulonta

Epäsuoraa Coombs -testiä käytetään raskaana olevien naisten seulomiseen IgG -vasta -aineiden varalta , jotka todennäköisesti kulkevat istukan läpi sikiön vereen ja aiheuttavat vastasyntyneen hemolyyttisen sairauden .

Laboratoriomenetelmä

IAT on kaksivaiheinen testi. (Ristikkäinen kaavio esitetään visuaalisesti kaavion alaosassa esimerkkinä epäsuorasta Coombs -testistä).

Ensimmäinen taso

Potilaita, pestyjä punasoluja (RBC), joilla on tunnettuja antigeenejä, inkuboidaan potilaan seerumin kanssa, joka sisältää tuntematonta vasta -ainepitoisuutta . Jos seerumi sisältää vasta -aineita antigeeneille punasolujen pinnalla, vasta -aineet sitoutuvat punasolujen pintaan.

Toinen taso

Punasolut pestään kolme tai neljä kertaa isotonisella suolaliuoksella ja inkuboidaan sitten ihmisen vastaisen globuliinin kanssa. Jos vasta -aineet ovat sitoutuneet punasolujen pinta -antigeeneihin ensimmäisessä vaiheessa, punasolut agglutinoituvat, kun niitä inkuboidaan tässä vaiheessa ihmishormonin kanssa (tunnetaan myös Coombs -reagenssina), ja epäsuora Coombs -testi on positiivinen.

Titraukset

Laimentamalla vasta -aineita sisältävää seerumia voidaan mitata vasta -aineen määrä seerumissa. Tämä tehdään käyttämällä seerumin kaksinkertaisia ​​laimennoksia ja määrittämällä seerumin suurin laimennus, joka pystyy tuottamaan asiaankuuluvien punasolujen agglutinaation.

Coombsin reagenssi

Coombs -reagenssia (tunnetaan myös nimellä Coombs -antiglobuliini tai anti -ihmisglobuliini ) käytetään sekä suorassa Coombs -testissä että epäsuorassa Coombs -testissä. Coombsin reagenssi on ihmisvastainen globuliini . Se valmistetaan ruiskuttamalla ihmisen globuliinia eläimiin, jotka tuottavat ihmisen immunoglobuliineille ja ihmisen komplementtijärjestelmän tekijöille spesifisiä polyklonaalisia vasta -aineita. Voidaan käyttää tarkempia Coombs -reagensseja tai monoklonaalisia vasta -aineita .

Parannusmedia

Sekä IgM- että IgG -vasta -aineet sitoutuvat voimakkaasti toisiaan täydentäviin antigeeneihin. IgG -vasta -aineet ovat reaktiivisimpia 37 ° C: ssa. IgM-vasta-aineet helposti havaita suolaliuokseen ajan huoneenlämpötilassa IgM vasta-aineet voivat kuroa välillä RBC: n, koska niiden suuri koko, tehokkaasti luoda mitä nähdään agglutinaatio . IgG -vasta -aineet ovat pienempiä ja tarvitsevat apua siltaamiseen riittävän hyvin muodostaakseen visuaalisen agglutinaatioreaktion . Reagensseja, joita käytetään parantamaan IgG: n havaitsemista, kutsutaan potentiaattoreiksi. Punaisilla punasoluilla on negatiivinen nettovaraus, jota kutsutaan zeta -potentiaaliksi, mikä aiheuttaa niille luonnollisen vastenmielisyyden toisiaan kohtaan. Vahvistimet vähentävät punasolukalvojen zeta -potentiaalia. Yleisiä tehostajia ovat matalan ionivahvuuden liuos (LISS), albumiini , polyetyleeniglykoli (PEG) ja proteolyyttiset entsyymit .

Historia

Coombs -testin kuvaavat ensimmäisen kerran vuonna 1945 Cambridgen immunologit Robin Coombs (jonka mukaan se on nimetty), Arthur Mourant ja Rob Race . Historiallisesti se tehtiin koeputkissa . Nykyään se tehdään yleisesti käyttämällä microarray- ja geelitekniikkaa.

Suosittu kulttuuri

Arthur Haileyn vuonna 1959 julkaistussa kirjassa The Final Diagnosis sairaalan työntekijän vaimo on raskaana; hän on Rh -negatiivinen ja hän on Rh -positiivinen. Hän mainitsee tämän ja suosittelee epäsuoraa Coombs -testiä uudelle apulaispatologille, joka olettaa tämän olevan ilmeistä ja jopa allekirjoittaa hakemuslomakkeen Coombs -seerumin tilaamiseksi. Johtuen äärimmäinen kitsastelu Chief patologi , hän ohittaa toisen lääkärin päätös tilauksen Coombs seerumia, ja kieltäytyy suorittamasta epäsuora Coombs-testi, sen sijaan päättää, että proteiini ja suolaisten testit riittävät pelkästään. Tämä päätös aiheuttaa traagisia seurauksia. Vuoden 1961 elokuvasovitus romaanista Nuoret lääkärit kertoo tämän tarinan, mutta onnellisesti.

Viitteet

Ulkoiset linkit